Avidin saflaştırılması için biyotin tabanlı yeni afinite katı destek geliştirilmesi

Abstract

Bu çalışmada, yumurta beyazından Avidin proteininin saflaştırılmasına yönelik yeni bir afinite katı desteği geliştirilmiştir. Bu tez kapsamında Avidinin spesifik olarak afinite gösterdiği çapraz bağlayıcılar eşliğinde biyotin tabanlı bir kriyojel kolon geliştirilmiştir. Sentezlenen kriyojel kolonun karakterizasyonu amacıyla şişme testi, FT-IR ve SEM analizleri ile gerçekleştirilmiştir. Çalışmanın diğer bir aşamasında, sentezlenen kriyojel ayırma kolonu kullanılarak yumurta beyazından izole edilen Avidin ham ekstrakttan ayrılarak saflaştırılmıştır. Saflaştırılan Avidinin protein içeriği belirlenerek, UV spektrofotometrik ölçümleri ile kriyojel kolonlara Avidin bağlanması, optimizasyon çalışmaları ve tekrar kullanılabilirlik testleri gerçekleştirilmiştir. Saflaştırılan Avidin'in Dairesel Dikroizm (CD) Spektroskopisi ile ikincil ve tersiyer yapılarındaki değişim incelenmiş ve Sodyum Dodesil Sülfat Poliakrilamid Jel Elektroforez (SDS-PAGE) ile molekül ağırlığı tayin edilmiştir.