Aktinomiset kaynaklı lipaz geninin klonlanması, dizilenmesi ve ekspresyonu

Abstract

Bu çalışmada daha önceki çalışmalarda çeşitli toprak örneklerinden izole edilmiş 250 aktinomiset izolatı kullanılmıştır. Canlandırılabilen ı 49 izolatın kültürel ortamda derin difiizyon yöntemi ile lipaz aktiviteleri incelenmiş ve izolatların belirli derecelerdelipaz aktivitesi gösterdiği görülmüştür. Bunlardan 53 tanesi(% 36) ı cm ve daha az, 92 tanesi(% 62) 2 cm ve daha az, 4 tanesi(% 2) ise 2 cm'den daha fazla derinlik oluşturmuştur. En yüksek lipaz aktivitesini gösteren izolatın ı6S rRNA gen bölgesine dayalı moleküler identifikasyonu yapılmıştır. NCBI veri tabanında BLAST programı kullanılarak yapılan analiz sonucu izolatın veritabanındaki erişim numarası EU283368. ı olan 'uncultured actinobacterium clone AS42 ı6S ribosomal RNA gene' e % 97 oranında benzediği görülmüştür. Bu izolatın genomik DNA'sının rastgele parçalanarak klonlanması sonucu ı 6 adet klon elde edilmiştir ve izolatın gen o mik DNA kütüphanesi oluşturulmuştur. Elde edilen klonların kültürel ortamda lipaz aktiviteleri incelenmiş, fakat klonların lipaz aktivitesi göstermediği görülmüştür.