Glisin, gaba, glutamat ve Serin'in kulometrik detektörlü sıvı kromatografisi kullanılarak mikrodiyaliz örneklerinden tayini

Abstract

Amino asitler beyinde en çok bulunan nörotransmiterlerdir. Bu nedenle, beyin hücre dışı konsantrasyonlarının ölçülmesi sinirbilim alanında ilgi konusudur. Uyarıcı amino asitlerin seviyesinde bir artış veya inhibe edici asitlerin seviyesinde bir azalma meydana gelirse epilepsi hastalığı ortaya çıkmaktadır. Bu çalışmada, mikrodiyaliz numunelerinde amino asitlerin beyin dokularındaki tayini için ön kolon o- ftalaldehit ile türevlendirme kullanılarak ve elektrokimyasal saptama ile ters fazlı yüksek performanslı sıvı kromatografisi yöntemi geliştirilmiştir. Yöntem sırasında sabit faz olarak bir silika Agilent Zorbax Eclipse C18 (3.0mm x 150 mm, 5 µm partikül boyutuna) kolonu, hareketli faz olarak ise gradiyent elünte kullanılmıştır. Çalışma tamponu olarak fosfat tamponu (50 mM, pH: 6,5) belirlenmiştir. 0,8 mL/dk akış hızında çalışılmıştır. 10 µL enjeksiyon hacmi ve kolon sıcaklığı 40°C olarak ayarlanmıştır. Geliştirilen yöntem ilgili ICH kılavuzu’ne göre valide edilmiş; yöntem kesinlik, doğruluk, doğrusallık, seçicilik parametreleri yönünden uygun bulunmuştur. Saptama sınırı ve tayin sınırı değerleri sırasıyla Glutamik Asit 0,02 µg/mL ve 0,06 µg/mL, Glisin için 0,05 µg/mL ve 0,02 µg/mL’dir. Gamma aminobutirik asit için 0,3 µg/mL ve 1,01 µg/mL, Serin için 0,13 µg/mL ve 0,4 µg/mL olarak hesaplanmıştır. Yöntemin doğrusallık aralığı 0,05-2 µg/mL bulunmuştur.