Haloferax alexandrinus'tan asimile edici nitrit redüktaz enziminin saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

Abstract

Bu tez çalışmasında halofilik arke Haloferax alexandrinus'tan asimile edici nitrit redüktazın (NiR) saflaştırılması ve bu enzimin biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Haloferax alexandrinus asimile edici nitrit redüktaz enzimi 34,5 kat saflaştırılmıştır. Saf enzimin sodyum dodesil sülfat- poliakrilamid jel elekroforezi (SDS-PAJE) analizleri NiR'in 62 kDa moleküler ağırlığında bir monomer olduğunu göstermiştir. H. alexandrinus'un nitrit ve metil viyolojen için Km değerleri sırasıyla 8,25 mM ve 1,46 mM'dir. Asimile edici nitrit redüktazın optimum pH'ı 7.5 ve optimum sıcaklığı 60°C'dir. 3.5 M NaCl konsantrasyonunda maksimum aktivite ölçülmüştür ve aynı konsantrasyonlardaki KCl varlığında enzim aktivitesi ikiye katlanmıştır. H. alexandrinus'un enzim aktivitesi siyanür, azid, etilendiamin tetra asetik asit, klorat ve sülfit varlığında düşmüştür. Ancak ditiotreitrolün enzim aktivitesi üzerine bir etkisi yoktur.