Protein G saflaştırılması için biyokromatografi materyali geliştirilmesi

Abstract

Bu çalışmada Streptekokal Protein G saflaştırılmasına yönelik IgG bağlı makro gözenekli kriyojel kolon dolgu materyali geliştirilmiş ve bu kolon dolgu materyalinin Protein G saflaştırılmasındaki etkinliği araştırılmıştır. Bu amaçla; çalışmanın ilk aşamasında fotosensitif rutenyum tabanlı aminoasit monomeri, bis(2,2’-bipiridil)MATrp-MATrp-rutenyum(II) kullanılarak ANADOLUCA metoduna göre poli(HEMA-ko-IgG) makro gözenekli kriyojel sentezlenmiştir. Sentezlenen kolon dolgu materyali, şişme testi, SEM ve FT-IR analizleri ile karakterize edilmiştir. Poli(HEMA-ko-IgG)’nin bağlama kapasitesi çalışmaları rekombinat Protein G kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Çalışmanın ikinci aşamasında; gerçek numune ile kolonun etkinliği incelenmiştir. Bu amaçla Streptococcus equi bakterisi kültüre edilmiş, hücre duvarı parçalanmış ve uygun ön deriştirme işlemlerinden sonra poli(HEMA-koIgG) kriyojeli kullanılarak Protein G saflaştırılmıştır. Çalışmanın son aşamasında ise saflaştırılmış Protein G’nin SDS-PAGE yöntemi kullanılarak molekül ağırlığı ve saflığı kontrol edilmiştir.