N-ras ve H-ras onkogenlerinin p53 ve MDM2 proteinlerinin sentezi üzerine etkilerinin DNA hasarlı kültür hücrelerinde araştırılması

Abstract

Bu çalışmada; ras transform hücrelerin DNA'larına, apoptosisi uyarmak için UV ışığı ile hasar verilerek, hücre döngüsünün düzenlenmesinde görevalan p53 ve onun regülatörü MDM2 proteinlerinin ekspresyonu ve apoptosis üzerine etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla çalışmalarda kullanılmak üzere, H-ras aktif 5RP7 fibroblastları ve insan N-ras aktif CO25 miyoblastları seçilmiştir. UV ışığının farklı dozlarına maruz bırakıldıktan sonra hücre çekirdeklerinde ve morfolojisinde meydana getirdiği apoptotik değişimler AO/EB boyama yöntemi ile belirlenmiş ve DNA 'larında meydana gelen fragmentasyonlar tespit edilmiştir. p53 ve MDM2 proteinlerinin ekspresyonlarını ve hücre içindeki lokalizasyonlarını belirlemek için, FITC işaretli özgül antikorlar veDapi çift işaretleme yöntemi kullanılmıştır. Sonuç olarak; H-ras transformasyonu; fibroblast hücrelerinde p53'ün MDM2 tarafından parçalanmasıyla, UV ile uyarılan apoptosise karşı dayanıklılığı arttırırken; N-ras transformasyonunun, miyoblast hücrelerde p53'e bağlı apoptotik yolu uyardığı ve apoptosise duyarlı hale getirdiği görülmüştür.