Ras aktif hücrelerde kaspazların apoptoz üzerine etkileri

Abstract

Bu tez kapsamında, Cis-platin ile stimüle edilen insan-U20S (osteosarkoma) hücrelerindeki morfolojik ve biyokimyasal değişimler, kaspaz-3 ve kaspaz-9 enzimlerinin apoptotik mekanizma üzerine etkileri incelenmiştir. Bunun yanı sıra, çeşitli ekstrasellüler proteinler (fibronektin, kollajen ve trombospondin-l) ile aktive edilen integrin reseptörlerinin U20S hücre apoptoz mekanizmasındaki rolü çok yönlü olarak araştırılmıştır. Mitokondriyal aktiviteye yönelik yapılan sitotoksik incelemeler, Cis-platinin IC50 değerinin 4 mM olduğunu göstermiştir. Sitotoksik etkisi bulunmayan konsantrasyon aralığı kullanılarak yapılan morfolojik ve nüklear boyama çalışmaları ise, apoptotik hücre zar bütünlüğünün bozulduğunu, hücre zarında tomurcuklanmaların meydana geldiğini, nüklear apoptotik değişimlerin ve DNA parçalanmasının başladığını göstermiştir. Kaspaz-9'un kaspaz-3'e oranla Cis-platın ile stimüle edilen U20S apoptoz mekanizmasında anlamlı bir etkiye sahip olduğu flurosan-işaretleme yöntemi ile bulunmuştur. Farklı integrinlerin aktivasyonuna bağlı olarak da apoptotik osteosarkoma hücre oranında değişimler gözlenmiştir. Özellikle fibronektine (a4/b1, a3/b1, av/b3) bağlanan hücreler de apoptoz oranının, diğer proteinlere oranla daha düşük olduğu tespit edilmiştir. Cis-platin ile DNA hasarı oluşturularak U20S hücrelerinde apoptoz mekanizmasının moleküler düzeyde araştırılması ve metastazda önemli olan integrin reseptörlerinin nasıl etkilendiğinin tespit edilmesi çeşitli tedavi yöntemlerinin geliştirilmesine olanak sağlayacağı düşünülmektedir.