Palaemonetes turcorum (Holthuis, 1961) (Decapoda)'da d-aminolevulinik asit dehidrataz enziminin biyokimyasal karakterizasyonu

Abstract

Bu tezde yurdumuz için endemik olan Palaemonetes turcorum'da d-Amino Levulinik Asit Dehidrataz (ALAD; Porfobilinojen sentaz; E.C.4.2.1.24) enziminin kurşun ile etkileşimi ve enzimin biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Palaemonetes turcorum'da, kurşun asetat için LD50 değeri 0.135 mM olarak bulunmuştur. Bu değer Palaemonetes turcorum'lara uygulanarak, kurşun asetatın in vivoda ALAD üzerine olan inhibe edici etkisi saptanmış ve zamana göre değişimi incelenmiştir. Zamana bağlı olarak enzim inhibisyonunun ve karaciğerdeki kurşun miktarının arttığı saptanmıştır. Palaemonetes turcdrum ALAD'ının optimum pH'sı 7 civarında ve enzimin ısıya dayanıklı olduğu (SSOC) bulunmuştur. Kinetik analizler sonucu V max değeri 22.83 nmol/PBG/saat/mg protein ve Km değeri 0.06 mmol/reaksiyon karışımı olarak bulunmuştur. Mg+2 ve Mn+2 enzim aktivitesini artınrken Zn+2'nin aktiviteyi etkilemediği, EDTA'nın ise aktiviteyi azalttığı saptanmıştır. Amonyum sülfat ve Sephadex G-200 jel ortamıile yapılan işlemlerden sonra enzim 51 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAJE ile yapılan çalışma sonucunda saflaştırılan Palaemonetes turcorum ALAD'ının moleküler ağırlığı 237.6 kDa ve bir alt ünitesinin moleküler ağırlığı 35.6 kDa olarak bulunmuştur.