Haloferax alexandrinus'dan (euryarchaeota-archaea) asimile edici nitrat redüktaz'ın saflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu

Abstract

Bu tezde halofilik arkeal olan H. alexandrinus'da asimile edici nitrat redüktaz (NAS) enziminin saflaştırılması ve enzimin biyokimyasal özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. H. alexandrinus Nas enziminin nitrat ve metil viyolojen için Km değerleri sırasıyla 0,045 nM ve 0,0065 nM olarak bulunmuştur. Enzimin optimum pH'sı 9.5 ve optimum sıcaklığı 50 ⁰C olarak saptanmıştır. Enzimin izoelektrik noktası 5.3 olarak belirlenmiştir. NaC1 konsantrasyonunun artışına paralel olarak Nas enziminin aktivitesininde arttığı gözlenmiş ve maksimum aktivitenin 3 M NaC1 konsantrasyonunda olduğu belirlenmiştir. Farklı tuz konsantrasyonları ile yapılan çalışmada H. alexandrinus Nas enziminin aktivitesinin KC1 ile NaC1'ye göre %100'ün üzerinde arttığı, ancak MgC1₂ ve A1C1₃ ile yapılan karşılaştırmada ise enzimin inhibe olduğu tesbit edilmiştir. H. alexandrinus Nas enziminin aktivitesinin siyanür, azid, EDTA ve sülfit ile azaldığı, DTT'nin ise etkilemediği tesbit edilmiştir. Saflaştırma basamaklarından sonra enzim 70 kat saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ile yapılan çalışma sonucunda ise saflaştırılan H. alexandrinus Nas'ının moleküler ağırlığının 72±1.8 kDa ve monomer olduğu saptanmıştır.