Halofilik mikroorganizmalar olan pseudomonas halophila DSM 3050 ve haloarcula hispanica ATCC 33960'da glutatyon s-transferaz (GST) enziminin optimizasyonu ve spesifik aktivitesinin belirlenmesi

Abstract

Bu çalışmada halofilik bakteri Pseudomonas halophila DSM 3050 ve halofilik arke Haloarcula hispanica ATCC 33960'da GST aktivitesinin karakterizasyonu yapılmıştır. GST enzim aktivitesinin belirlenmesi, substrat olarak 1-kloro-2,4- dinitrobenzen (CDNB) varlığında spektrofotometrik olarak gerçekleştirilmiştir. %25 tuz konsantrasyonuna sahip besiyerinde gelişen P. halophila için pH'sı 6.5 olan 50 mM Tris- HCl tamponu, 50 μg protein, 1.0 mM CDNB, 4.0 mM kofaktör glutatyon (GSH) ve 25°C enzimin maksimum aktivite gösterdiği optimum koşullar olarak belirlenmiştir. H. hispanica için ise maksimum aktivite alınan koşullar %25 tuz konsantrasyonu, pH'sı 9.0 olan 50 mM Tris-HCl tamponu, 50 μg protein, 1.0 mM CDNB, 1.0 mM GSH ve 25°C olarakgözlenmiştir. Optimize koşullar altında mikroorganizmaların GST aktiviteleri ölçülmüştür. P. halophila GST spesifik aktivitesinin ortalama 53.48 nmol/dk/mg ve H. hispanica GST spesifik aktivitesinin ortalama 19.68 nmol/dk/mg olduğu belirlenmiştir. Sonuçlar ANOVA, Duncan ve student-t testleri yardımıyla istatistiksel olarak değerlendirilmiştir. Lineweaver-Burk grafiği çizilerek enzimin CDNB ve GSH'a karşı kinetik özellikleri belirlenmiştir. P. halophila GST aktivitesinin CDNB'ye karşı Km ve max değerleri sırasıyla 0.52 mM, 80.65 nmol/dk/mg ve GSH'a karşı Km ve Vmax değerleri sırasıyla 1.89 mM, 81.30 nmol/dk/mg olarak bulunmuştur. H. hispanica'da CDNB'ye karşı GST aktivitesinin Km ve Vmax değerleri sırasıyla 0.46 mM ve 27.93 nmol/dk/mg; GSH'a karşı Km ve Vmax değerleri ise sırasıyla 0.13 mM ve 22.03 nmol/dk/mg olarak hesaplanmıştır. Hanes-Woolf ve Eadie-Hofstee grafikleri de çizilmiş ve bu grafiklerden elde edilen sonuçların Lineweaver-Burk grafiğinden alınan sonuçlar ile uyumlu oldukları görülmüştür.