Vazoaktif intestinal polipeptid (VIP) ve hipofiz adenilat siklaz aktive edici polipeptid (pacap)'in LC-MS/MS yöntemi ile karakterizasyonu

Abstract

Nöropeptidler, nöronlar tarafından iletişim için kullanılan peptitlerdir. Vazoaktif intestinal polipeptit (VIP) ve hipofiz adenilat siklaz aktive edici polipeptid (PACAP), beynin hipotalamus bölgesinden elde edilen glukagon/sekretin ailesine ait polipeptitlerdir. Amino asit dizilimleri açısından birbirlerine oldukça benzerler. Bu tez çalışmasında, VIP ve PACAP-38'in, hassas Sıvı Kromatografi-Kütle Spektrometri (LC-MS/MS) yöntemi ile analitik açıdan karakterizasyonu yapılıp incelenmiştir. Her iki peptitin analizi için kromatografik (C8 ve C18 ayırım kolonları, hareketli fazın organik çözücü ve asit içeriği, akış hızı gibi) ve kütle spektrometrik (peptitlere ait temel iyon ve parçalarının gözlenmesi, parçalama voltajı, parçalama enerjisi gibi) parametreler incelenmiştir. Peptitlerin adsorpsiyon sorununun kaynakları araştırılmış ve adsorpsiyonu engelleyici faktörler LC-MS/MS analizlerinde denenmiştir. Analizlerde VIP için 665,9 (M+5) m/z temel iyonu ve 799,5 ve 770,7 m/z parça iyonları gözlenirken, PACAP-38 için 504,3(M+9), 567,3(M+8), 648,3(M+7) ve 755,9(M+6) m/z temel iyonları üzerinden incelemeler yapılmıştır. Ayrıca peptitlerin yüzeye adsorbsiyonunu engelleyici olarak albümin çözeltisi ve yüzey aktif maddelerin analizlere etkisi araştırılmıştır.