Bazı nörokimyasal maddelerin sıçan beyninden mikrodiyaliz ile toplanması ve analitik yöntemlerle miktar tayini

Abstract

Bu çalışmada sıçan beyin mikrodiyalizatlarında bazı nörokimyasal maddelerin tayini için elektrosprey iyonizasyonlu sıvı kromatografi kütle spektrometri (ESI-LC-MS) yöntemi tanıtılmaktadır. İyon tuzağı kütle analizörü ile sekiz adet nörokimyasal (epinefrin, norepinefrin, dopamin, 3,4-dihidroksifenilasetik asit (DOPAC), histamin, g-aminobutirik asit, L-glutamat, asetilkolin) için kütle spektrumları ve kütle parçalanmaları belirlendikten soma sıvı kromatografik ayırma koşulları incelenmiştir. C18 kolon (2.1x100 mm, 3.'5 mm) ve % 0.1 asetik asit içeren su-asetonitril gradient hareketli faz sisteminde türevlendirici ajan olan 4-kloro-7-nitro-2,l,3-benzoksadiazol (NBD-C1) ile türevlendirilerek ayrılan g-aminobutirik asit ve histamin için yöntemin validasyonu gösterilmiştir. GABA-NBD için 267®249 m/z kütlesinden oluşan parçalanma kütlesi, histamin için sadece 275 m/z ana kütlesi kullanılarak oluşturulan kromatogramda miktar tayini yapılmıştır. Doğrusal aralık g-aminobutirik asit için 10-500 ng.mL­­­­­-¹­­­, histamin için 50-1000 ng.mL-­­­­­­­­­­­­­­­¹ bulunmuştur. Yöntemin tayin sınırları g-aminobutirik asit için 10 ng.mL-¹, histamin için 50 ng.mL-¹ olarak hesaplanmıştır. Yöntemin GABA ve histamin için elde edilen doğruluğu % 98 dolayında sağlanan geri kazanım ile, tekrar edilebilirliği ise gün içi % 1.65-2.62, günler arası % 1.23-4.93 bağıl standart sapma değerleri ile gösterilmiştir. Sıçan beyninin ventral anterior nucleus, lateral hypothalamus ve corpus striatum bölgelerinden toplanan mikrodiyalizat örneklerinde g-aminobutirik asitin bazal düzeyleri ölçülerek sırasıyla 123.25±0.67, 151.41+18.53, 94.96±0.53 ng.mL-¹ olarak bulunmuştur.