Bazı fenolik asitlerin ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UHPLC) ile tayini ve yöntem validasyonu

Abstract

Bu çalışmada, bazı önemli fenolik asitlerden olan Protokateşik asit (PCA), p-Hidroksibenzoik asit (p-HBZ), Kafeik asit (CAF), Şirincik asit, (SYR) p-Kumarik asit (p-COU), t-Ferulik asit (t-FER), Rozmarinik asit (ROS) ve t-Sinnamik asit (t-CIN)'in eriklerde ve bazı gıda takviyelerinde tayini için hızlı ve seçici ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UHPLC) yöntemi geliştirilerek validasyonu yapılmıştır. Fenolik asitler, Agilent Zorbax Eclipse Plus C8 (3,0 mm×150 mm×1,8 µm) kolonunda ve A (su:metil alkol:formik asit; 88:10:2; h/h/h), B (su:metil alkol:formik asit; 8:90:2; h/h/h) hareketli fazı kullanılarak UV dedektör ile 280 nm dalga boyu değerinde belirlenmiştir. Akış hızı 0,4 ml/dk ve enjeksiyon hacmi 10 µl'dir. Geliştirilen yöntemin kesinlik, doğruluk, gözlenebilme sınırı (LOD), tayin alt sınırı (LOQ) ve kararlılık parametrelerine göre validasyonu yapılmıştır. Çalışılan fenolik asitler için yüksek korelasyon katsayıları (r2= 0,9991-0,9999) ile doğrusal grafikler elde edilmiştir. Gün içi ve günler arası kesinlik deneylerinde %3,82'den küçük %BSS değerleri ile yöntem tekrarlanabilirdir. Deneyler farklı erik türlerinde ve gıda takviye edici olarak kullanılan piknogenol ile supradin tabletlerinde gerçekleştirilmiştir. Erik sularından fenolik asitlerin saflaştırılması için C18-OH kolonu ile katı faz ekstraksiyonu (SPE) yapılmıştır.